酶底物法在菌落总数检测中的应用（酶底物法检测原理）

酶底物法是一种基于微生物酶促反应的快速检测技术，凭借高特异性、快检测速度的优势，成为水质、食品、医疗污水等领域微生物筛查的主流方法，尤其在大肠菌群、大肠埃希氏菌等目标菌群的检测中表现突出，完美弥补了传统平板培养法耗时久、操作繁琐的短板。

2023年10月1日正式实施的GB/T 5750.12-2023中针对水中菌落总数检测新增加了酶底物检测方法，相较于传统平皿计数法中存在的痛点，酶底物法在检测结果准确性、使用便捷性以及环境和人员操作要求等方面，都有大幅度改善。

1.酶底物法检测原理 

酶底物法检测试剂使用基于复合酶底物技术（Multiple Enzyme Technology）的培养基，培养基中含有多种酶底物，能够被微生物生长过程中产生的酶水解。在36℃±1℃条件下培养48 h后可释放荧光物质4-甲基伞形酮（4-MU），其在366 nm紫外灯照射下可发出蓝色荧光，配合84孔定量盘使用，对呈现蓝色荧光的培养盘孔槽，进行计数并对比MPN表，即可确定原始水样中最可能的菌落总数。

2.特点

①操作便捷

无需准备琼脂平板，手工操作少于1min操作简单，降低了操作过程中的污染风险。

②检测范围广

检测范围为：1~738MPN/mL，比平板计数法范围大，克服平板计数时部分菌落生长过快，计数不准确的缺点。

③快速读取结果

48h显示结果，72h内观察结果仍然有效，减少人员加班。

酶底物法以精准、快速、便捷的特性，推动微生物检测从实验室走向现场，成为保障食品安全和水环境安全的重要技术手段。只要把控好操作细节，就能让每一次检测都成为精准判断微生物污染状况的可靠依据。